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地衣芽孢桿菌 EC34-01 生物膜形成組成物及其應用
111PF0010

植病系   黃姿碧老師

本發明係關於一種包含地衣芽孢桿菌菌株EC34-01 (Bacillus licheniformis EC34-01) 培養物之生物膜形成組成物,特徵在於該培養物係藉由將地衣芽孢桿菌EC34-01菌株以天然資材組成之液態培養基進行培養而成。本發明之地衣芽孢桿菌EC34-01組成物可於不結球白菜葉表及根系纏據形成生物膜,藉以提升不結球白菜對乾旱與淹水逆境之耐受性,並且具有降解化學農藥,例如馬拉松、第滅寧等的功效。

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低鉀含量蔬菜的栽培方法
107PC0032

植病系   黃姿碧老師

本發明提供一種低鉀含量蔬菜的栽培方法,其係以一固態介質進行栽培,且低鉀含量蔬菜的栽培方法包含以下步驟。提供一蔬菜類繁殖體。進行一育苗步驟,以獲得一蔬菜幼苗。進行一第一栽培步驟,其係以一第一肥料組合物進行栽培。進行一第二栽培步驟,其係以一第二肥料組合物進行栽培,以得一低鉀含量蔬菜,其中第一肥料組合物包含磷酸、鉀及氮,且第二肥料組合物包含磷酸、氮、鈣及鎂。藉此,以本發明之低鉀含量蔬菜的栽培方法所栽培之低鉀含量蔬菜可提供人們更加健康的飲食選擇,使其具有良好的市場潛能。

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矽溶液所調製的植物保健製劑及其製程
108PF0010X

植病系   黃振文老師

本發明提供植物保健製劑,包含一矽溶液,該矽溶液包含二氧化矽及水;及一鈣肥、一氮肥、一鉀肥及一抑菌資材之其中之一,其中該鈣肥選自以下項目其中之一:過磷酸鈣[Ca(H2PO4)2]、氧化鈣(CaO)、過氧化鈣(CaO2)、氫氧化鈣[Ca(OH)2]及硫酸鈣(CaSO4);該氮肥選自以下項目其中之一:尿素(NH2CONH2)及硫酸銨[(NH4)2SO4];該鉀肥選自以下項目其中之一:氯化鉀(KCl)、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、硫酸鉀(K2SO4)及矽酸鉀(K2SiO3);及該抑菌資材選自以下項目其中之一:二氧

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植物保護用鏈黴菌(Streptomyces padanus PMS-702)組成物製劑及其製法
091PC001

植病系   黃振文老師

本發明係關於一種農作物生物防治用組成物,特別是一種鏈黴菌屬Streptomyces padanus PMS-702植物保護用製劑,此種生物防治用組成物至少包含1種自Streptomyces padanus PMS-702中分離出的抗生物質為Fungichromin,該種植物保護用製劑極適用在植物保護工作中,用以防治多種重要植物病原菌。

奈米物質促進蔬菜種子及幼苗生長的技術

植病系    張碧芳教授 

物質大小介於 1-100 nm 之間會有新的特性,此尺寸大小的物質被稱為奈米材料。奈米材料應用於農業上為新興的技術且具有潛力。本研發成果發現:利用奈米鈣 (0.104%) 或奈米鈣矽 (Ca 0.104%,Si 0.032%) 等奈米物質處理番茄、小白菜或西瓜種子,會有不同程度之促進生長的效果,其中奈米鈣矽浸種處理可促進番茄生長;奈米鈣矽浸種處理或奈米鈣矽浸種處理並添加豆漿稀釋液都可增加小白菜鮮重;奈米鈣可促進西瓜種子發芽後的側根生長。歸言之,上述之奈米物質在合適的濃度、施用方法及搭配特定材料之下,可促進蔬菜種子及幼苗生長。

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枯草桿菌Bacillus subtilis TKS1-1 活體生物製劑之量產技術

植病系    曾德賜教授 

本案擬移轉枯草桿菌Bacillus subtilis TKS1-1活體生物製劑之量產與應用技術,供產業界商品化應用。技術內容主要涵蓋下述項目: 1、擬轉移之枯草桿菌TKS1-1菌株為本研究室自埔里有機堆肥介質中分離篩選獲得,由對峙培養測試,已證實其對腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)、立枯絲核菌(Rhizoctonia solani AG4)、白絹病菌(Sclerotium rolfsii) 、柑橘潰瘍病菌(Xanthomonas axonopodsis pv. Citri ) 及蕃茄細菌性斑點病(Xanthomonas axonopodis pv. Vesicatoria) 等多種植物病原真菌、細菌具廣譜性拮抗活性。 2、以TKS1-1菌株所建立之內生孢子製劑液體發酵量產技術,量產可達每毫升5x 109 cfu/ml 以上,所產製菌體可於6℃下存活至少半年以上。此一技術平台已經於50 L 級液體發酵槽建立,所產製內生孢子製劑可應用範圍涵蓋植物保護、微生物肥料製作、動物飼料添加、環境復育、及水產養殖等多方面。在植物保護方面,產出之內生孢子液體製劑可直接提供葉部噴灑、土壤澆灌、種子浸漬或包被等應用。也可以進一步在室溫下噴霧乾燥製成粉、粒劑,所製備TKS1-1製劑已於溫室試驗證實對水稻白葉枯病病菌、柑橘潰瘍病菌與檬果黑斑病菌等之感染有明顯的抑制效果。 3、 所產製生物製劑在施用後對植物生長發育及抗病性均有明顯促進功效,已證實具生長促進作用之作物包括甘藍、蕃茄及柑橘等作物。

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利用木瓜輪點病毒輕症疫苗防治越南木瓜病毒

植病系    葉錫東教授 

(一) 接種適當的高力價寄主,大量繁殖木瓜輪點病毒輕症疫苗,再接種至木瓜幼苗。由保存於冷凍庫的原原種疫苗,僅能繁殖一次供用,以免變異。 (二) 以高壓噴槍進行大量接種木瓜幼苗的技術。 (三) 疫苗接種成功的驗證方法,以酵素連結免疫分析法 (ELISA)或者核酸增幅放大法(RT-PCR)測定。 (四) 接種成功的木瓜苗,進一步以扦插大量繁殖的技術。 (五) 接種成功的木瓜苗,進一步以嫁接大量繁殖的技術 (六) 田間標準栽培及管理程序,若有嚴重感染之病株,應立即拔除,以免超毒株系擴散開來。 (七) 交互保護技術可用於任何木瓜品種,尤其是最優良的夏威夷相關品系,可充分掌握高價木瓜的國內外市場。

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木瓜組織培養繁殖技術

植病系    葉錫東教授 

(一) 由田間選定的優良木瓜品系的兩性株,取其芽點進行滅菌及無菌操作,以作為組織培養之母本。 (二) 各種培養基,如芽點增殖培養基、發根誘導培養基、發根培養基的配方及製作方法。 (三) 選定芽點的大量增殖,使成為多芽體。 (四) 切取大芽,在發根培養基上,誘發根原體之行成。 (五) 在溫控生長室內,通氣條件下的發根培養基進行發根。 (六) 在溫控生長室內,馴化已發根的幼苗。 (七) 在溫控溫室內進一步健化組培木瓜苗。 (八) 適當的包裝方式,進行長程運輸,供應國內市場,或者以空運方式外銷國外。

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百香果病毒核酸檢測方法以及無病毒苗木繁殖技術 Detection of passion fruit viruses by specific nucleic acid primers and establishment of the virus-free passion fruit seedling propagation system

植病系    葉錫東教授 

本技術轉移之內容包括下列事項: 1. 百香果病毒核酸分子檢測技術。 2. 由已檢測合格的百香果無病毒苗,經無性繁殖方式進行無病毒苗的原種保存。 3. 建立以嫁接方式繁殖無病毒百香果苗木之系統。 4. 百香果苗木病毒檢測驗證及田間病毒調查。 Description of Invention in English The content of this technology transfer includes following items: 1. Detection of passion fruit infecting viruses by nucleic acid primers. 2. Establishment of virus-free passionfruit stock plants. 3. Establishment of virus-free passion fruit seedlings propagation system by grafting. 4. Certification of virus-free passion fruit seedlings and field survey.

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高效率木瓜組織培養微體繁殖技術

植病系    葉錫東教授 

本技術轉移之內容包括下列事項: 1. 以組織培養方法將選定之特殊木瓜株系進行莖頂培養。 2. 由已建立之莖頂芽體,經荷爾蒙處理在特定培養條件之下形成叢生芽體 3. 由叢生芽體中選取大於0.5公分之芽體在特定條件下處理荷爾蒙以誘導根原體之形成。 4.在特定條件下進行發根。 5.在生長箱特定條線下進行以發根小苗之馴化處理。 6.在特定溫室及網室條件下進行健化。 基於上述之過程,叢生芽體每兩星期可以循環一次,而進行發根及馴化處理之單株木瓜苗可以在芽體切取後高效率發根,於五個星期內販售至栽培者。以上所述之各項技術將轉移至授權廠商,但廠商之基本設備,人員培訓及特殊問題之解決將由技術提供者協助,但其相關費用應由授權之廠商提供。

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兩種蘭花病毒檢測用多元抗體及單元抗體

植病系    詹富智教授 

本研發成果針對臺灣重要出口高經濟作物-蝴蝶蘭及其它蘭科作物所研發之血清學檢測系統,包含齒舌蘭輪斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, ORSV)及蕙蘭嵌紋病毒(Cymbidium mosaic virus, CymMV)專一性單元抗體及多元抗體,可應用於血清學原理相關之病毒檢測技術。

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重要茄科作物檢疫類病毒健康種苗檢測技術

植病系    詹富智教授 

茄科作物是世界廣泛性種植之經濟作物,其絕對寄生性病 害主要為病毒及類病毒病害,其中類病毒在植物上造成的典型病徵為植株矮化、葉片褪綠、葉片及莖部畸形與壞疽,嚴重時甚至會造成植株死亡,常造成嚴重的經濟損失,有些可藉由種子傳播,造成農業上的損失。現今我國出口之茄科作物種子,如甜椒、番茄等,出口至澳洲、紐西蘭及歐盟等各國都需進行類病毒檢測,主要針對Pospiviroid 屬中的Columnea latent viroid (CLVd)、Pepper chat fruit viroid (PCFVd)、Potato spindle tuber viroid(PSTVd)、Tomato apical stunt viroid (TASVd)、Tomato chlorotic dwarf viroid (TCDVd)、Tomatoplanta macho viroid (TPMVd) 六種類病毒。近年,本實驗室研發此六種類病毒的快速檢測系統,已針對此六種重要茄科作物檢疫類病毒開發出共六組之專一性引子對及一組可同時檢測六種類病毒之簡併式引子對,可應用one step RT-PCR於茄科種子及田間植株之類病毒檢測。另外,透過分別機械接種六種類病毒在不同品種之番茄與辣椒植株,並觀察記錄不同發病時期與不同品種之番茄與辣椒作物上造成的病徵,可在田間初步透過病徵觀察或進一步檢測疑似病株等方式,確認植株是否受類病毒感染,以避免從罹病株採種。另外,依據Naktuinbouw’s protocol的種子檢測取樣方式,配合修改過之核酸萃取方法與所設計之一組可同時檢測六種檢疫類病毒之簡併式引子對,規劃茄科作物類病毒種子檢測之流程,以進行欲出口之茄科作物種子的檢測,有效阻止病原透過種子傳播到新的地區造成危害。

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蘭花病毒檢測用多元抗體及單元抗體

植病系    詹富智特聘教授 

本研發成果針對臺灣重要出口高經濟作物-蝴蝶蘭及其它蘭科作物所研發之完備血清學檢測系統,包含齒舌蘭輪斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, ORSV)、蕙蘭嵌紋病毒(Cymbidium mosaic virus, CymMV)及番椒黃化病毒(Capsicum chlorosis virus, CaCV)專一性單元抗體及多元抗體;以及落葵皺葉嵌紋病毒(Basella rugose mosaic virus, BaRMV= Phalaenopsis chlorotic spot virus, PhCSV)、康乃馨斑駁病毒(Carnation mottle virus, CarMV)、番茄斑萎凋病毒 (Tomato spotted wilt virus, TSWV)、鳳仙花壞疽斑點病毒 (Impatiens necrotic spot virus, INSV)及石斛蘭黃化嵌紋病毒(Dendrobium chlorotic mosaic virus, DeCMV)之多元抗體。

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生產生物膜保護農作物健康的枯草桿菌Bacillus subtilis MCLB2之功效與試量產應用

植病系    黃姿碧  黃振文  陳郁璇 

本開發技術涵蓋: 1. 自台灣本土番茄根圈土壤分離枯草桿菌屬Bacillus subtilis strain MCLB2菌株。 2. 本MCLB2菌株經16S rRNA序列分析及Biolog生理生化鑑定為Bacillus subtilis。 3. B. subtilis strain MCLB2具拮抗Xanthomonas campestris pv. campestris、Xanthomonas citri subsp. citri、Xanthomonas oryzae、Colletotrichum gloeosporioides、Ralstonia solanacearum、Fusarium oxysporum及Rhizoctonia solani等多種植物細菌與真菌病原活性;並可產生C14及C15 family surfactins。 4. B. subtilis strain MCLB2具纏聚於番茄根系形成生物膜能力。 5. B. subtilis strain MCLB2具溶磷活性、產生植物生長素(吲哚乙酸)及2,3-butanediol等促進植物生長特性,可作為生物肥料應用。 6. 應用開發之B. subtilis strain MCLB2發酵液,可有效促進番茄生長,並具抑制由R. solanacearum所引起之茄科細菌性青枯病之效果。 計畫執行機關∕系所:國立中興大學植物病理學系

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凝結芽孢桿菌量產製程及應用技術

植病系    黃姿碧副教授  黃振文教授 

本技術為開發具多功能應用性之凝結芽孢桿菌量產製程及應用技術,所開發技術涵蓋: 1. 凝結芽孢桿菌最適配方、發酵參數及標準作業流程,使以噸級發酵槽(750公升)液態量產菌量可達3.5×109 cfu/ml。 2. 應用本研發之配方及量產所開發之凝結芽孢桿菌發酵液可促進草莓及胡瓜之生長並具Rhizoctonia solani所引起苗期病害之防治效果。 3. 可添加於畜禽產飼料,使用一個月後可改善離乳仔豬之日增重與飼料換肉率,並可提高糞便中乳酸菌並降低大腸桿菌數及臭味,且對豬隻適口性無不良影響。 4. 可添加作為水產飼料,可抑制魚病感染,降低腸道中病原數量,並促進腸道形成益菌菌叢。 5. 本技術另建立可偵測凝結芽孢桿菌之引子對。

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低鉀含量蔬菜的栽培方法

植病系    黃姿碧教授 

本技術提供一種栽培低鉀蔬菜之方法,為透過營養調控與搭配固態介質進行栽培,此方法可使蔬菜於栽培過程中不致產生缺鉀離子之生理障礙,並穩定蔬菜收成量。以本方法所栽培之蔬菜,其鉀含量為未經過前述之低鉀含量蔬菜的栽培方法栽培之蔬菜的鉀含量的30%至60%以下,且硝酸鹽含量低於未經過前述之栽培方法所栽培之蔬菜的硝酸鹽含量。本技術已有成功栽培並量產出6種低鉀含量蔬菜,包含萵苣、小白菜、青江菜、小松菜、油菜及空心菜等之實例驗證,可進行更大規模商業量產,所栽培生產的低鉀蔬菜可提供給有低鉀飲食需求消費者另一飲食控制之選擇。

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低鉀含量蔬菜栽培方法

植病系    黃姿碧教授 

本技術提供一種栽培低鉀蔬菜之方法,為透過營養調控與搭配固態介質進行栽培,此方法可使蔬菜於栽培過程中不致產生缺鉀離子之生理障礙,並穩定蔬菜收成量。以本方法所栽培之蔬菜,其鉀含量為未經過前述之低鉀含量蔬菜的栽培方法栽培之蔬菜的鉀含量的30%至60%以下,且硝酸鹽含量低於未經過前述之栽培方法所栽培之蔬菜的硝酸鹽含量。本技術已有成功栽培並量產出6種低鉀含量蔬菜,包含萵苣、小白菜、青江菜、小松菜、油菜及空心菜等之實例驗證,可進行更大規模商業量產,所栽培生產的低鉀蔬菜可提供給有低鉀飲食需求消費者另一飲食控制之選擇。

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具多種真菌細菌病原拮抗活性之本土分離鏈黴菌菌株(Streptomyces parvulus 2A11)及培養技術

植病系    黃姿碧教授  黃振文教授 

本開發技術涵蓋: 1. 分離自台灣本土彰化縣秀水鄉植物根圈土壤鏈黴菌屬Streptomyces parvulus 2A11菌株。 2. 本鏈黴菌菌株經16S rRNA序列分析及ISP (The International Streptomyces Project)系列培養基鑑定與具產生抗癌用藥物放線菌素(actinomycin D)等抗生物質之Streptomyces parvulus NBRC 13191及Streptomyces parvulus BCRC 12046S具高相同度。 3. S. parvulus 2A11菌株具拮抗Xanthomonas campestris pv. campestris、Xanthomonas citri subsp. citri、Xanthomonas oryzae、Phytophthora capsici、Colletotrichum gloeosporioides與Fusarium oxysporum等多種植物病原細菌、卵菌及真菌功用。 4. S. parvulus 2A11菌株於馬鈴薯薯塊及蘿蔔幼苗接種試驗結果顯示不具植物毒性。 5. S. parvulus 2A11菌株具拮抗Bacillus cereus及Stenotrophomonas maltophilia等多種人體伺機性病原能力。 6. S. parvulus 2A11菌株最適產生抗生物質之培養配方。

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保護草莓及金線連苗健康的蕈狀芽孢桿菌BM103

植病系    黃振文  林秋琍  湯佳蓉  黃介辰  鍾光仁  鍾文鑫 

利用16S rDNA 鑑定並在NCBI資料庫比對本生物防治菌之序列,將 BM103 鑑定為 Bacillus mycoides (99%)。將B. mycoides BM103 菌株醱酵液以澆灌與噴灑方式處理草莓植株,於人工接種草莓炭疽病菌後觀察其防病潛力。結果發現BM103 醱酵液可使草莓炭疽病菌菌絲膨大與細胞質分佈不均而無法正常生長;若噴灑於草莓植株則可有效降低草莓炭疽病之罹病率。由苗期開始定期澆灌BM103 醱酵液之草莓植株,其生長勢較對照組植株旺盛,且有生長旺盛之根系及較多的分蘗數。田間定期施用BM103於育苗期,結果發現處理組之草莓植株生長勢良好,對照組植株則受炭疽病菌影響有 20% 補植率。將BM103應用於草莓種苗上,發現其可降低草莓萎凋病50%以上之罹病度;應用於金線連種苗,發現其可降低莖腐病罹病度約30-40% ;另外對於金線連的株高與鮮重都有很大的促進作用,株高增加35%,鮮重更增加65%。分析處理過蕈狀芽孢桿菌 B. mycoides BM103草莓植株的抗病基因表現情形,結果發現屬於誘導系統抗性 (Induced systemic resistance, ISR) 防禦路徑的脂氧合酶 (Lipoxygenase) lox 基因於處理過BM103 後有明顯被誘導表現的現象。

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研製DQ-168微生物製劑產品調理植物健康(Development of DQ-168 microbial preparation product for nursing plant health)

植病系    黃振文教授 

由水稻根部分離獲得的微生物DQ-168菌株,觀察其菌體細胞與菌落形態及採用 16S rDNA鑑定分析後,再以NCBI資料庫進行基因序列比對,確定DQ-168菌株歸屬於 Bacillus mycoides複合菌群。將微生物DQ-168菌株的發酵液均勻加入大豆胜肽、玉米 澱粉、奈米鈣粉、矽藻土、苦茶粕、菜籽粕及幾丁聚醣等原料,調配製成的DQ-168 微生物製劑產品,可以顯著促進水稻、番茄、草莓、胡瓜、木瓜及金線連等植株的生 長與產量達35-65%。此外,DQ-168產品尚可減少農作物遭受鎌孢菌、腐黴菌、炭疽 病菌及白粉病菌的為害達20-50%左右;且亦可誘發植株抵抗乾旱逆境。分析DQ-168 產品處理過的草莓植株之抗病基因表現,發現歸屬於誘導系統的抗病性(Induced Systemic Resistance,ISR)防禦路徑的脂氧合酶(Lipoxygenase) lox基因被顯著誘導啟 動表現。

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運用芽孢桿菌研製生物刺激素培育健康作物種苗

植病系    黃振文教授 

利用大豆粉、糖蜜、糊粉精或脫脂奶粉製作成液態的培養基後,培養Bacillus mycoides FL02,Bacillus subtilis FL102及Bacillus mycoides FL103等三菌株,四天後分析發酵液中含有生物表面素異構物 (biosurfactants)、二硫二甲基(dimethyl disulfide)、氨氣(ammonia)、吲哚乙酸(indoleacetic acid)、苯乙酸(Phenylacetic acid, PAA)及苯乙酸甲酯 (Methylphenyl acetate, MPA) 等產物。進一步,利用三菌株的代謝物添加磷酸鹽、幾丁聚醣及微量元素製作成的生物刺激素,可以有效促進菜苗生育及誘導植株抗病。

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具有防治瓜類蔬菜幼苗猝倒病與十字花科根瘤病的蕈狀芽孢桿菌新菌系

植病系    黃振文教授 

本發明係關於一種新穎的本土菌系蕈狀芽孢桿菌Bacillus mycoides PDML RS1013菌株,其兼具有可防治瓜類蔬菜幼苗猝倒病與十字花科根瘤病之特性。

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植物保護用鏈黴菌(Streptomyces padanus PMS-702)組成物製劑及其製法

植病系    黃振文教授 

自台灣各地農田及農業廢棄物中分離獲得放線菌200餘菌株,其中PMS-702菌株在SMG養液中的培養液可有效防治多種作物真菌性病害。進一步,在田間測試PMS-702製劑防治番茄晚疫病 (Phytophthora infestans) 的效果,結果顯示PMS-702製劑確實可以有效防治番茄晚疫病;並可提高番茄的果實產量。利用分光光度計及薄層色層分析PMS-702培養濾液,發現其含有多烯類大環內脂(polyene macrolide)的抑菌物質。比較數種溶劑萃取PMS-702培養液中有效成分的效率,結果以乙酸乙酯萃取PMS-702的醱酵濾液及菌絲層之物質,對於甘藍立枯絲核菌 (Rhizoctonia solani, AG-4) 之抑制活性最佳。測試多烯類大環內脂對立枯絲核菌與卡斯比亞炭疽病與番茄晚疫病三種植物病原菌的抑制效果,結果顯示治黴色基素對立絲枯核菌的菌絲生長、卡斯比亞炭疽病菌的孢子發芽及番茄晚疫病菌靜止子發芽均具有抑制作用。綜合上述研究成果,可知PMS-702培養液中存在有多烯類大環內脂,是抑制植物病原真菌的重要成分之一。

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蛋白激活子防治植物病害之新技術

植病系    黃振文教授 

由Alternaria sp.(鏈格孢屬) ALA、ABA、APR菌株所萃取得到的蛋白激活子稀釋液施用於甜椒、白菜及胡瓜的葉面後接種不同之病原菌,結果顯示甜椒幼苗處理ABA-TP稀釋液後可降低立枯病發生率12%;白菜幼苗處理 ABA -TP 1000倍稀釋液亦明顯降低立枯病發生率60%;白菜葉片處理 ABA-TP 及 ALA-TP 1000 倍稀釋液分別減少白菜炭疽病發生率 25%與 30%;胡瓜葉片處理 ABA-TP 及 ALA-TP 1000 倍稀釋液分別減少胡瓜炭疽病發生率 60% 與 52%。進一步分析白菜的抗病相關酵素(Phenylalanine ammonia lyase, PAL及Peroxidase, POD)之活性,結果發現處理APR01-TP的白菜,其PAL和POD活性明顯的增加,顯示APR01-TP具有誘導白菜抗病的因子。將ALA及APR之蛋白激發子基因利用pET28a載體轉殖至E. coli BL21菌株中,經IPTG誘導大量表現蛋白後破碎菌體純化標地蛋白,隨後施用於胡瓜葉片,結果顯示兩者轉殖蛋白皆具有誘導胡瓜抗炭疽病的效果,其防治率分別為82%及51%。

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